薄層層析是將吸附劑或者支持劑（有時加入固化劑）均勻地鋪在一塊玻璃上，形成薄層。把欲分離的樣品點在薄層上，然后用適宜的溶劑展開，使混合物得以分離的方法。

 

    薄層層析不僅可以用于純物質(zhì)的鑒定，也可用于混合物的分離、提純及含量的測定。還可以通過薄層層析來摸索和確定柱層析時的洗脫條件。

 

    根據(jù)分離的原理不同，薄層層析可以分為兩類：用吸附劑鋪成的薄層所進行的層析為吸附薄層層析，吸附薄層中常用的吸附劑為氧化鋁和硅膠；用纖維素粉、硅膠、硅藻土為支持劑鋪成的薄層，屬于分配薄層層析。

　　　 吸附TLC→固定相為吸附劑→氧化鋁、硅膠。（較多用）

TLC→

　　　 分配TLC→固定相為液態(tài)（通常為水）→固定相吸附在支持劑上。

 

1、吸附薄層

 

基本原理：吸附薄層主要是利用吸附劑對樣品中各成分吸附能力不同，及展開劑對它們的解吸附能力的不同，使各成分達到分離。

　　

    吸附作用主要由于物體表面作用力、氫鍵、絡(luò)合、靜電引力、范德華力等產(chǎn)生。吸附強度決定于吸附劑的吸附能力，還受被吸附成分的性質(zhì)影響，更與展開劑的性質(zhì)有關(guān)。

吸附薄層層析：在硅膠薄層板上，樣品中的兩成分是兩種結(jié)構(gòu)近似的染料，在展開劑四氯化碳的作用下。在展開劑和薄層板之間不斷地產(chǎn)生吸附、解吸，再吸附，再解吸。由于對氨基偶氮苯的極性比偶氮苯的極性稍強一些，層析的結(jié)果，對氨基偶氮苯受到的吸附作用稍強于偶氮苯，從而將兩者分離。展開結(jié)束以后，會在薄層板上形成兩個斑點，混合物中的成分得以分離。

 

   特別是對未知結(jié)構(gòu)的成分分析，設(shè)計并摸索出合理的層析條件是首要任務(wù)。只有先設(shè)計出可用的層析條件，再經(jīng)摸索改進，才可能對未知或者已知成分進行成功地分離。然后才能談得上進一步的分析研究。

　　薄層層析的三項基本構(gòu)成物質(zhì)是：樣品組分、吸附劑、展開劑。摸索層析條件，實際上是協(xié)調(diào)上述三者的關(guān)系，尋求一種能夠有效分離樣品組分的配合方案及實際操作要領(lǐng)。層析條件的選擇是以樣品中的各組分為中心，適當(dāng)調(diào)適展開劑的吸附劑的極性來實現(xiàn)的。

 

2、分配薄層層析

 

   用極性溶劑吸在固體支持劑上所形成的混合物，鋪成薄層（或裝柱），然后活化、點樣（或上樣），再用極性較弱的展開劑（或洗脫劑）進行展開。

 

原理：在展開過程中，各成分在固定相和流動相之間作連續(xù)不斷的分配，由于各成分在兩相間的分配系數(shù)不同，因而可以達到相互分離的目的。

　　

    以CS表示某成分在固定相中的濃度，Cm表示某成分在固定相中的濃度。則分配系數(shù)：K＝CS/Cm。分配層析所用的固定相一般為水及各種水溶液（酸、堿、鹽與緩沖液）、甲酰胺、低級醇（親水性）等。分配層析所用的流動相選用與水不溶（或微溶）的有機溶劑。如石油醚、苯、鹵代烷類、脂類、酮類（如丁酮）、醇類（丁醇、戊醇）等或者它們的混合物。

　　

    分配層析對混合物中各成分的分離，主要決定于各成分分配系數(shù)的差異，一般說來，對于種類成分均能適用，特別能適用于水溶性、親水性物質(zhì)而又稍能溶于有機溶劑中者。這樣就恰好彌補了一般吸附層析（如氧化鋁吸附層析適用于親脂性物質(zhì)）的不足。但是，由于分配柱層析樣品處理量較少，因此，如能用吸附柱層析解決問題時，常優(yōu)先使用氧化鋁或硅膠吸附柱層析。

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